PCR 之原理與應用

吳游源

  • 出版商: 五南
  • 出版日期: 2020-02-01
  • 定價: $480
  • 售價: 9.0$432
  • 語言: 繁體中文
  • 頁數: 268
  • ISBN: 957763821X
  • ISBN-13: 9789577638212
  • 立即出貨 (庫存=1)

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商品描述

聚合酶鏈鎖反應(polymerase chain reaction; PCR)是一個被高度依賴、且被普遍應用的分子生物學技術,它可以將一特定DNA片段(或基因)由構造複雜的染色體或其他DNA來源(或樣品)中大量增幅出來。這就好像是一個超炫的戲法,可以由一堆如山的黃沙中,將其內所埋藏的幾顆金沙子篩選出來,並且複製成幾百萬顆金沙。如此,不但可以證明沙堆中確有金沙子的存在,並可以因此獲得大量的金沙。換句話說,PCR是一個分析型(analytical)也是一個製備型(preparative)的研究工具,它不但可以藉由強效的增幅機制,來偵測一個DNA樣品中是否含有某一特定DNA片段(或基因),而且藉由增幅可以大量製取(有時也可加以修飾)此DNA片段,以作為多種生技應用研究之材料,例如DNA 定序、基因選殖、重組蛋白表現等。此項技術可說是現今分子生物學研究中最重要的分析工具之一,同時也是多數從事生物醫學、分子遺傳分析、及基因診斷等相關領域研究所不可或缺的技術。

作者簡介

吳游源

學歷
美國普渡大學化學系生物化學組博士
現職
嘉義大學生化科技學系助理教授
專長
生物化學、分子生物學、分子毒物

目錄大綱

【PART I 聚合酶鏈鎖反應(Polymerase Chain Reaction; PCR)之緣起與原理】

第1章 PCR發展之背景與歷史
1-1 PCR:一個二十世紀分子生物學研究的突破性技術
1-2 PCR技術的發展簡史

第2章 典型PCR的反應成分與條件設定
2-1 典型的PCR反應成分
2-2 典型的PCR反應條件
2-3 循環增幅的細節(Details of Cycling Amplification)
2-4 PCR偵測實驗的對照組

第3章 PCR的產率與專一性(Sensitivity and Specificity of PCR)
3-1 PCR反應可能遭遇的問題與改進方法
3-2 PCR反應抑制劑
3-3 增進PCR產率與專一性的試劑
3-4 調整PCR的方法來增進產率或專一性
3-5 長片段與富含GC(GC-rich)的DNA片段之PCR增幅

第4章 PCR的忠誠性(或出錯率)(Fidelity of PCR Amplification)
4-1 PCR的錯誤率(或忠誠性)對我們的研究有何影響?
4-2 聚合酶加入錯誤核苷酸的機制
4-3 影響PCR忠誠性的因素

【PART II PCR之基礎應用(Basic Applications of PCR)】

第5章 逆向PCR(Inverse PCR; IPCR):引子背對背的PCR連接反應媒介PCR(Ligation Mediated PCR; LMPCR)
5-1 IPCR對未知序列之增幅
5-2 IPCR應用於刪除突變與定點突變之基因建構
5-3 以連接反應媒介PCR(LMPCR)進行未知序列之增幅
5-4 LMPCR指紋分析(LMPCR Fingerprinting Analysis)
5-5 以LMPCR進行DNA胞內腳紋(in vivo Footprinting)分析

第6章 多重引子PCR(Multiplex PCR; mPCR)與巢狀PCR(Nested PCR)
6-1 多重引子PCR(Multiplex PCR; mPCR)
6-2 巢狀PCR(Nested PCR)

第7章 反轉錄PCR(Reverse Transcription PCR; RT-PCR)
7-1 RT-PCR的用途
7-2 RT-PCR的基本步驟
7-3 反轉錄酶的特性與選擇
7-4 單一步驟或兩步驟RT-PCR
7-5 RT-PCR 經常被用於分析特定基因之差異性表現

第8章 定量PCR與即時PCR(Quantitative PCR and Real-time PCR)
8-1 早期定量PCR是一種終端PCR(End-point PCR)的分析方式
8-2 新一代的定量PCR:即時PCR(Real-time PCR)

第9章 應用PCR做全基因體差異性分析(Whole Genome Variation Analysis by PCR)
9-1 RAPD:隨機增幅多型性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA)
9-2 AFLP:增幅片段長度多型性(Amplified Fragment Length Polymorphism)
9-3 IRS-PCR:散布性重複序列PCR(Interspersed Repeat Sequence PCR)
9-4 STR-PCR:短而連續重複序列PCR(Short Tandem Repeat PCR)
9-5 CODIS:組合式DNA指標系統(Combined DNA Index System)

第10章 PCR於基因選殖之應用(PCR Mediated DNA Cloning)
10-1 T/A(或稱A/T)選殖(T/A Cloning)
10-2 利用PCR 將目標DNA 兩側加入選殖所需特定限制性內切酶之辨識序列
10-3 不需使用連接酶或限制性酵素的特殊PCR基因選殖
10-4 使用degenerate引子的PCR與基因建構
10-5 利用PCR 來製備單股目標基因(或DNA)

第11章 利用PCR偵測基因突變(Mutation Detection by PCR)
11-1 已知突變點與突變方式之PCR偵測
11-2 特定基因中之未特定突變點(或型態)之PCR相關偵測

第12章 利用PCR來創造突變(PCR Mediated Mutagenesis)
12-1 利用PCR定點突變(PCR Mediated Site-Directed Mutagenesis)
12-2 以兩步驟PCR方法來製備一長片段插入性突變(Two-PCR Method for Making a Long Insertion Mutant)
12-3 連接子掃描突變(Linker Scanning Mutagenesis; LSM)
12-4 利用PCR進行隨機突變(PCR Mediated Random Mutagenesis)

第13章 結語

英中文索引